稳定细胞系

      根据实验不同情况,有时需要将某种基因长期在细胞中过表达或沉默稳定表达,以满足研究基因的功能等实验目的。此时可以提供药物筛选建立稳定表达该基因的细胞系。传统的方法是利用真核表达的基因载体中带有的标记,如潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin),将基因转染进入细胞后,通过不断加药筛选,即可获得特定的稳定细胞系。

      汉恒生物摒弃了常用的但假阳性高的G418药物筛选方法,利用慢病毒可以整合到细胞基因组的特性,采用效率更高的慢病毒感染的筛选方法,再通过高效的puro抗性筛选预建立了表达不同基因,不同种属的稳定细胞系。在U87-MG、293T、2F-2B、4T1、786-O、9607、A549、AGS、AP73、BV2、CHG-5、CHO、CNE2、ECa、F5M2、FADU、GES-1、H1299、H446、Hela、Hep-2、hepa1-6、HEPG2、HGC27、HL60、HUH7、K562、U251、T24、SW620、Saos-2、Rse96、MKN45、MEF88、MDCK、MDA-231、MSC(mouse)、LO2、LLC等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。除了本身带有的puro抗性之外,稳定细胞系也带有多种不同标签,如GFPRFPLuc等。

汉恒生物提供前期慢病毒载体构建及后续细胞稳定系筛选服务。对筛选好的细胞系,也提供相关基因的QPCR和Western Blot检测服务,详情请咨询汉恒生物的技术人员400-092-0065。下面是已经建立的细胞系实例。

 

汉恒生物实例

 

 U87-MG

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                                                                                                                                      CHG-5(RNAi)

                                                                                                                              786-O(RNAi)

 

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